news 2026/5/1 9:18:23

细胞热迁移(CETSA)实验

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张小明

前端开发工程师

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文章封面图
细胞热迁移(CETSA)实验

细胞热迁移(CETSA)实验是一种通过检测蛋白质在加热后溶解度变化来分析其热稳定性和与小分子相互作用的技术。

背景说明

CETSA的原理建立在一个经典的生化概念之上:蛋白质与其配体(如药物)结合后,其热稳定性通常会发生改变。通俗的理解是:结合了药物的蛋白就像穿了“防弹衣”,在面对 热应激时,比没有“防弹衣”的蛋白更加稳定,更不容易受热变性沉淀。

其技术原理分步解析:

1.热变性与沉淀

蛋白质在加热到一定温度时会发生变性,其三维结构展开,内部的疏水区域暴露出来。变性的蛋白质会失去可溶性,相互聚集并从溶液中沉淀出来。变性和沉淀的蛋白在离心后位于沉淀中,而仍保持可溶性和天然结构的蛋白则在上清中。

2.配体结合的保护效应

当一个小分子药物(配体)与它的靶蛋白活性位点特异性结合时,这种结合行为就像“订书钉”一样,稳定了蛋白的三维结构,使其构象更紧固。这种“紧固”状态使得蛋白需要更高的能量(即更高的温度) 才会展开变性。因此,与药物结合的蛋白在给定的加热温度下,比未结合的蛋白更不容易变性沉淀。

3.检测与量化

通过检测在不同加热温度下(或同一温度下,不同药物处理)仍保持可溶的靶蛋白量,就可以判断药物是否与靶蛋白结合。通常使用Western Blot、免疫荧光或高通量质谱(用于发现未知靶点)来定量检测上清中剩余的天然靶蛋白的量。

图1 CETSA技术原理(Tu et al., 2023)。

服务流程

客户在线下单——细胞培养——药物浓度摸索——正式实验,药物处理——细胞收集及温度梯度处理——细胞裂解及蛋白提取——WB检测——图片及数据分析

服务内容及说明

适用范围

1、药物靶点验证与作用机制研究;

2、高通量药物筛选;

3、研究细胞信号通路与蛋白质功能。

客户下单及项目信息填写

在我司官网http://www.biorun.com/进行注册或登录,请客户按照页面提示填写:

1、项目名称、选择项目类型、填写个人信息及联系方式进行预提交;

2、提交项目所需要的具体信息:细胞样本、目标蛋白及对应的一抗等。

实验信息

实验过程中客户可以随时登入管理系统查看项目实时进展情况。实验结题时系统会通过短信自动通知客户,并发送实验报告查看网址。实验结题后,实验报告,检测结果可在线查看或打印,并永久保留。

实验周期

致电详询。

实验交付内容

1、蛋白的WB条带图;

2、完整的实验数据及实验报告。

案例展示

CETSA用于测定HSP70与Ver(一种药物)在不同时间药物暴露下的一系列温度范围内相互作用的热不稳定性。

图2 CETSA用于测定HSP70与Ver的热不稳定性。

参考文献

Tu Y, Tan L, Tao H, et al. CETSA and thermal proteome profiling strategies for target identification and drug discovery of natural products[J].Phytomedicine, 2023, 116: 154862.

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