AF430标记的Streptavidin，链霉亲和素,AF430偶联物使用注意事项

英文名称：Streptavidin, AF555 conjugate，AF555 Streptavidin，AF555标记的Streptavidin，Alexa Fluor555 Streptavidin

中文名称：AF555标记的链霉亲和素，链霉亲和素偶联AF555，链霉亲和素,AF555偶联物

【Streptavidin, AF555 conjugate 技术概述】

Streptavidin, AF555 conjugate 是一种基于生物素-链霉亲和素高亲和力系统与荧光标记技术相结合而成的检测工具。其核心组成部分为链霉亲和素（Streptavidin）与荧光染料Alexa Fluor 555（AF555）的共价结合物。该复合物适用于多种需要高灵敏度、高特异性信号放大的检测体系。

【链霉亲和素的特性】

链霉亲和素是一种来源于细菌的蛋白质，其四级结构包含四个相同的亚基，每个亚基可特异性结合一个生物素分子。该结合具有解离常数（Kd）约为10⁻¹⁵ M的量级，是目前已知最强的非共价相互作用之一。这种结合具有高速度、高稳定性及抗干扰能力，在多种pH值、温度及变性剂存在条件下仍能保持结合活性。

【荧光染料 Alexa Fluor 555】

AF555是一种磺化罗丹明类染料，其激发光最大波长约为555 nm，发射光最大波长约为565 nm。该染料具有较高的荧光量子产率、光稳定性及水溶性。其光谱特性与常用光学滤光片系统兼容，适用于多数配备标准绿色荧光通道的荧光显微镜、流式细胞仪及酶标仪。

【结合物的构建与性能】

通过化学偶联方法将AF555共价修饰至链霉亲和素上，形成稳定的结合物。制备过程通常控制染料与蛋白的比例，以在保持链霉亲和素生物素结合能力的同时，提供足够的荧光信号。最终产物经纯化去除未结合染料，并通过色谱、电泳等方法验证其均一性。

【主要应用方向】

该结合物可用于任何基于生物素标记的检测系统：

蛋白免疫检测：作为生物素化二抗或生物素化探针的检测试剂，用于 Western blot、ELISA、免疫组化等。

核酸检测：与生物素标记的核酸探针联用，用于荧光原位杂交、核酸印迹等。

细胞表面标记分析：在流式细胞术或显微成像中，检测生物素标记的细胞表面配体或受体。

其他生物分子定位研究：适用于任何将生物素作为报告分子的定位或定量分析体系。

【使用注意事项】

建议使用前通过离心或温和混匀确保溶液均匀。

避免反复冻融，宜分装保存于-20 °C以下避光环境。

实验体系中需注意生物素污染，如血清、样品或缓冲液中含游离生物素可能影响结合效率。

建议通过预实验确定最佳使用浓度，以避免非特异性结合或信号过饱和。

【与其他类似物的比较】

与抗体直接标记相比，该结合物可通过生物素-链霉亲和素级联放大检测信号。与同类其他荧光标记的链霉亲和素相比，AF555在光稳定性、水溶性及pH耐受性方面具有一定优势。与基于其他亲和系统（如His-Tag、GST-Tag）的方法相比，生物素-链霉亲和素系统通常具有更高的亲和力与结合速度。

【质量控制与验证】

合格产品应通过以下表征：

光谱分析确认吸收峰与荧光发射峰符合标准。

功能试验验证其与包被于固相的生物素化分子的结合能力。

凝胶电泳或高效液相色谱分析确认纯度与均一度。

【参考文献】

Green, N. M. (1975). Advanced Protein Chemistry, 29, 85–133.

Invitrogen Corporation. (2005). The Handbook: A Guide to Fluorescent Probes and Labeling Technologies, 10th ed.

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