Cal-670-Dextran Conjugate，Cal-670 荧光标记葡聚糖偶联物，结构特点
中文名称：Cal-670 荧光标记葡聚糖偶联物
概述
Cal-670-Dextran Conjugate 是一种水溶性荧光标记多糖，由葡聚糖（Dextran）与 Cal-670 荧光染料共价偶联形成。Cal-670 是一种红色荧光染料，具有较高的光稳定性和量子产率，激发波长约 647 nm，发射波长约 670 nm，适合用于多色荧光实验和长时间成像。Dextran 提供水溶性、生物相容性和低免疫原性，将其与 Cal-670 偶联后形成稳定的荧光标记多糖，可用于细胞成像、血液追踪、纳米颗粒标记和药物递送研究。
化学组成与结构特点
葡聚糖链（Dextran）
葡萄糖单元通过 α-1,6 键形成主链，部分 α-1,3 键形成分支；
高水溶性、柔性链、低免疫原性；
羟基提供偶联位点，可与活化荧光染料形成稳定共价键；
分子量可调节（常见 10 kDa–70 kDa），影响溶解性、体内分布和细胞摄取。
Cal-670 荧光染料
激发波长约 647 nm，发射波长约 670 nm；
高量子产率、光稳定性好；
可通过活化基团（如 NHS ester）与 Dextran 羟基反应形成稳定偶联。
偶联物结构特性
Dextran
−
O-(Covalent linkage)-Cal-670
Dextran−O-(Covalent linkage)-Cal-670
Dextran 提供柔性水溶性骨架，Cal-670 提供红色荧光信号；
共价连接稳定，适合体内外实验。
Cal-670-Dextran Conjugate 制备方法
一、实验材料与试剂
Dextran（适当分子量，如 10 kDa）
Cal-670 NHS ester（活化的荧光染料）
有机溶剂：DMSO 或 DMF（用于溶解染料）
缓冲液：碳酸盐缓冲液（0.1 M, pH 8.3）或 PBS
去离子水
透析膜（分子量截断适合 Dextran）或凝胶过滤柱
二、反应原理
Cal-670 NHS ester 为活化酯，可与 Dextran 羟基或氨基发生亲核取代反应；
反应生成稳定的酯键或酰胺键，形成共价偶联物；
反应条件温和（pH 7.5–8.5），保证 Dextran 主链结构和荧光性能不受破坏。
三、制备步骤
Dextran 溶解
称取适量 Dextran，溶于碳酸盐缓冲液或 PBS，浓度约 10–50 mg/mL；
确保完全溶解，避免聚集。
荧光染料溶解
Cal-670 NHS ester 溶于少量 DMSO 或 DMF 中，浓度约 5–10 mg/mL；
避光操作，防止荧光染料光漂白。
偶联反应
将染料溶液缓慢加入 Dextran 溶液中，缓慢搅拌；
控制 pH 在 8.0–8.5 以提高 NHS ester 与羟基的反应效率；
反应在室温下进行 4–12 小时，避免高温破坏荧光性能；
反应比例可根据所需荧光标记密度调节，一般 1–5 mol% 荧光染料对糖基单元。
纯化
使用透析法去除未反应游离染料：将反应溶液装入透析袋（MWCO 约为 Dextran 分子量的一半），在去离子水中透析 24–48 小时，期间多次更换水；
或使用凝胶过滤柱（如 Sephadex G-25）进行分离；
收集含荧光标记的 Dextran 溶液，冷藏保存。
浓缩与储存
可通过旋转蒸发或冷冻干燥浓缩至所需浓度；
避光保存于 -20 ℃ 或 4 ℃，防止光漂白和水解。
四、注意事项
NHS ester 对水敏感，应尽量在溶液中快速使用，避免水解；
偶联反应温和进行，避免高温或强酸碱环境破坏 Dextran 或荧光染料；
偶联比例和荧光染料浓度需控制，过高可能导致水溶性下降或聚集；
透析或凝胶过滤纯化需充分，确保去除未反应游离染料，避免背景信号。
五、总结
Cal-670-Dextran Conjugate 是一种红色荧光标记多糖，通过 Dextran 羟基与 Cal-670 NHS ester 偶联形成稳定的荧光标记聚合物。其特点包括：
红色荧光信号强、光稳定性好，适合共聚焦显微镜、流式细胞术和多色成像；
Dextran 提供水溶性、柔性链和低免疫原性；
偶联稳定，适合体内外实验，包括细胞追踪、血液循环和纳米颗粒标记；
制备方法温和可控，偶联效率高，可通过透析或凝胶过滤纯化得到高纯度产品。
Cal-670-Dextran Conjugate 是现代细胞生物学、分子成像及药物递送研究中不可或缺的荧光标记工具，为高灵敏度追踪和功能化生物材料研究提供理想平台。
